紫外可見分光光度計是基于紫外可見分光光度法原理，利用物質分子對紫外可見光譜區的輻射吸收來進行分析的一種分析儀器。

它是一種廣泛應用于許多科學領域的技術，從細菌培養、藥物鑒定和核酸純度檢查和定量，到飲料行業的質量控制和化學研究。

紫外可見分光光度計由光源、單色器、吸收池、檢測器和信號處理器等部件組成。

? 光源

提供符合要求的入射光的裝置，有熱輻射光源和氣體放電光源兩類。熱輻射光源用于可見光區，一般為鎢燈和鹵鎢燈，波長范圍是350~1000nm；氣體放電光源用于紫外光區，一般為氫燈和氘燈，連續波長范圍是180~360nm。

? 單色器

將光源產生的復合光分解為單色光和分出所需的單色光束，它是分光光度計的心臟部分。

? 吸收池

又稱比色皿，供盛放試液進行吸光度測量之用，其底及兩側為毛玻璃，另兩面為光學透光面，為減少光的反射損失，吸收池的光學面必須完全垂直于光束方向。根據材質可分為玻璃池和石英池兩種，前者用于可見光光區測定，后者用于紫外光區。

? 檢測器

將光信號轉變為電信號的裝置，測量吸光度時，并非直接測量透過吸收池的光強度，而是將光強度轉換為電流信號進行測試，這種光電轉換器件稱為檢測器。

? 信號顯示系統

將檢測器輸出的信號放大，并顯示出來的裝置。

其分類方法有多種：

? 按光路系統可分為單光束和雙光束分光光度計；

? 按測量方式可分為單波長和雙波長分光光度計；

? 按繪制光譜圖的檢測方式分為分光掃描檢測與二極管陣列全譜檢測

已發現其適用于許多用途和情況，包括但不限于：

? 在水和廢水監測中的應用，對于一個水系的監測分析和綜合評價，一般包括水相(溶液本身)、固相(懸浮物、底質)、生物相(水生生物)。在水質的常規監測中，紫外可見分光光度法占有較大的比重。由于水和廢水的成分復雜多變，待測物的濃度和干擾物的濃度差別很大，在具體分析時必須選擇好分析方法；

? 在農產品和食品分析中可用于檢測的組分或成分有蛋白質、賴氨酸、葡萄糖、維生素C、硝酸鹽、亞硝酸鹽、砷、汞等；

? 在植物生化分析中可用于檢測葉綠素、全氮和酶的活力等；

? 在飼料分析中可用于檢測煙酸、棉酚、磷化氫和甲酯等。

1、DNA和RNA分析

快速驗證RNA和DNA的純度和濃度是一種特別廣泛的應用。在制備DNA或RNA樣品時，例如用于測序等下游應用時，通常重要的是要驗證其中一個樣品沒有被其他，或從分離過程中攜帶的蛋白質或化學物質。

2、藥物分析

最常見的用途之一是在制藥行業。使用數學導數處理允許解析原始光譜中的重疊吸收峰以識別單個藥物化合物。例如，苯佐卡因(一種局部麻醉劑)和金霉素(一種抗生素)可通過將第一個數學導數應用于吸光度光譜，同時在商業獸用粉末制劑中進行鑒定。通過為每種化合物構建校準函數，可以在微克/毫升的濃度范圍內同時定量這兩種物質。

3、細菌培養

OD測量通常使用600nm的波長快速進行，以估計細胞濃度并跟蹤生長。600nm是常用和優選的，因為它們在其中生長的細菌培養基的光學特性以及避免在需要繼續實驗的情況下損壞細胞。

4、飲料分析

識別飲料中的特定化合物是另一個常見應用。咖啡因含量必須在一定的法律限制內，紫外線可以促進量化。某些類別的有色物質，例如在藍莓、覆盆子、黑莓和櫻桃中發現的花青素，可以通過匹配它們在葡萄酒中的已知峰值吸收波長來輕松識別，以便使用紫外可見吸收進行質量控制。

5、其他應用

這種技術也可用于許多其他行業。例如，測量顏色指數可用于監控變壓器油，作為確保電力安全輸送的預防措施。測量血紅蛋白的吸光度以確定血紅蛋白濃度可用于癌癥研究。在廢水處理中，可用于動力學和監測研究，通過比較一段時間內的光譜，確保某些染料或染料副產品已被正確去除。

各項指標的重要性

1、穩定性的重要性

其穩定性應包括基線漂移和光度重復性兩個方面。使用時有一個很重要的原則或宗旨就是儀器要穩定可靠。如果一臺儀器的穩定性差，就不可能得到滿意的分析測試結果。儀器的穩定性是制造、挑選或使用紫外可見分光光度計的關鍵問題之一。

有些使用者把基線漂移作為穩定性，實際上基線漂移只是穩定性的內容之一。如果一臺紫外可見分光光度計的基線漂移符合使用要求，但其光度重復性很差，它仍然不能滿足使用者的使用要求；反之，如果一臺紫外可見分光光度計的光度重復性符合使用要求，但其基線漂移大，它也不能滿足使用要求。只有基線漂移很小、重復性也很好的儀器才能滿足使用要求，才是好儀器。

2、光譜帶寬的重要性

影響其定量分析誤差的因素很多，光譜帶寬就是主要因素之一。

首先來看A.J.Owen關于光譜帶寬對分析誤差的影響的研究，他指出光譜帶寬(SBW)/自然帶寬(NBW)≤O.1時，該儀器可滿足99%的試樣的分析，并且分析準確度可達99. 5%。從他給出的例子可知，當用1nm光譜帶寬測試時，可得出一個很漂亮的光譜圖；當同一操作者使用同一儀器和同一樣品，分別改用5nm、lOnm、20nm、50nm光譜帶寬測試時，所得的譜圖明顯比用1nm光譜帶寬測試的峰高低很多。在20nm光譜帶寬測試時，兩個峰變成了一個馬鞍形的峰。特別在50nm光譜帶寬測試時，兩個峰就變成了一個饅頭峰。由此可見，光譜帶寬對分析測試誤差的影響很大。

所以，應重視對光譜帶寬的選擇，以便提高分析測試結果的可靠性，提高分析測試技術水平。

3、基線平直度的重要性

其基線平直度是指每個波長上的光度噪聲，它是用戶最關心的技術指標之一，也是儀器各個波長上主要分析誤差的來源之一，它決定儀器在各個波長下的分析檢測濃度的下限(或決定各個波長下儀器的靈敏度)。

目前，許多使用者都不正確給出基線平直度這個關鍵性能技術指標。不管是高檔紫外可見分光光度汁，還是一般的紫外可見分光光度計，給的基線平直度都是±0.001A。其實這些達不到±0.001A，而有些優于±0.001A。所以，紫外可見分光光度計的設計者、生產者和使用者都要高度重視基線平直度這個技術指標。

4、線性動態范圍的重要性

線性動態范圍是影響分析測試誤差的技術指標。如果儀器的線性動態范圍很寬，則無論是對很稀的樣品還是對很濃的樣品進行分析時，其分析測試的結果都在所要求的誤差范圍內。所以應選擇線性動態范圍大的紫外可見分光光度計。

其線性動態范圍取決于儀器的雜散光和噪聲，它們是分測試誤差的主要來源。雜散光限制被分析測試樣品濃度的上限。噪聲限制被分析樣品濃度的下限。其線性動態范圍非常重要，它限制儀器的使用范圍(即限制儀器的適用性)。

5、波長準確度的重要性

所謂波長準確度是指波長的實際測定值與理論值(真值)的差。其波長準確度是很重要的技術指標，特別是在對不同儀器的測試結果進行比較時，波長準確度更加重要。

例如，若要比對兩臺紫外可見分光光度計對同一樣品的分析測試結果，如果儀器的波長準確度不好，就無法進行比較，或比較不出正確的結果。同一物質進行測試時，由于不同波長時摩爾吸光系數不同，就會有不同的靈敏度，即使是同一樣品，測試的數據也會不相同。如果使用者要用一臺紫外可見分光光度計做定量分析，若儀器的波長準確度不好，也會因儀器的波長誤差而產生很大的分析誤差。因此其波長準確度非常重要，它是制造者和使用者應該重視的一個技術指標。